气相色谱法检测有机酸

[关键词] 继发龋;牙本质;有机酸;气相色谱法

[摘要] 目的利用气相色谱法对继发龋牙本质中的有机酸进行定性和定量分析，探讨继发龋形成原因。方法收集45颗牙齿继发龋牙本质标本，用25g/L偏磷酸溶解并匀化，低温离心，取上清液加入100g/L高碘酸混匀后进样作样品乳酸分析，其他有机酸直接进样上清液分析。结果大多数继发龋牙本质标本中检测到乳酸、甲酸、乙酸、丙酸和丁酸存在，少数标本中检测到戊酸。测得的有机酸含量由高到低依次为甲酸 （23.27±4.36）g/L;乙酸（3.65±1.49）g/L;丙酸（2.38±0.48）g/L;乳酸（1.25±1.20）g/L;丁酸 （0.89±0.36）g/L和戊酸（0.05土0.13）g/L。结论继发龋牙本质中的有机酸以甲酸、乙酸和丙酸为主，占所有有机酸组成的93%，主要是细菌利用龋损中胶原等内源性物质产生。

[关键词] 继发龋;牙本质;有机酸;气相色谱法
继发龋的发生与多种因素有关。微生物产生的有机酸在继发龋发生、发展过程中具有重要作用。我们利用气相色谱法对继发龋牙本质中的有机酸组成和含量进行研究，以期进一步了解继发龋的发病机制。

1 材料和方法

1.1 仪器与试剂

普瑞GC-7800型气相色谱仪，PR-3000型色谱工作站，不锈钢螺旋柱2mX 3mm，填充GDX—101（80—100目）。

偏磷酸（AR），高碘酸（AR），乙醛（AR），双蒸水。标准品乳酸、甲酸、乙酸、丙酸、丁酸和戊酸均为分析纯，用时以25g/L偏磷酸稀释至0.25mol/L。

1.2 色谱条件

气体流速：载气（N2）50ml/min，H2 45 ml/min，空气500ml/min。温度：测乳酸时柱温140℃，汽化室温度150℃，氢焰检测器温度160℃;测其他有机酸时柱温190℃，汽化室温度220℃，氢焰检测器温度220℃，衰减：0，量程：10，纸速：3mm/min。

1.3定性与定量

利用保留时间一致和峰加高法定性。在样品中加入标准酸，根据峰高是否增加定性。用外标法定量测定，以单点校正法，用峰面积计算有机酸含量。

1.4标本的收集

收集30例患者（年龄22～60岁）的45颗牙齿继发龋牙本质标本进行实验。患牙均具有银汞合金或树脂充填体，或金属全冠修复体。标本的收集采用两种方法进行：①在患牙治疗前收集：将患牙区行阻滞或浸润麻醉，用刮匙去除表面菌斑及污物，去除原充填体或修复体，干棉球隔离患牙，气吹干牙表面，挖匙挖取软化牙本质;②从拔除的牙齿上收集：拔除患继发龋的牙齿，刮匙去除表面菌斑及污物，纵向劈开牙齿，去除原充填体或修复体后，用挖匙收集所有龋洞内的软化牙本质。继发龋的判断参照Hojo等「1」描述的方法。

5例正常牙本质标本取自己萌出的无龋阻生第三磨牙作对照，将取下的正常牙本质块用金刚砂车针磨成碎片，在研钵中研碎。

标本收集后立即称重，放置于具盖密封的试管中—20℃贮存备测。

1.5样品处理和分析

将标本用25g/L的偏磷酸配成150g/L的混悬液，匀化5 h后，10 000 r/min，4℃离心10min。取5ul上清液加5ul 100g/L的高碘酸混合后进样1ul，在上述色谱条件下作样品乳酸分析，其他有机酸直接进样1/ul上清液分析。

2 结果

2.1 精密度与准确性测定结果

对一已知含量样品作标准加入回收实验，并重复测定5次，测其含量，浓度差即为检出量。标本中甲酸、乙酸、丙酸的回收率均在96%以上，因样品中乳酸、丁酸和戊酸含量较少，因此误差较大，但回收率仍大于92%。乳酸、甲酸、乙酸、丙酸、丁酸和戊酸的变异系数（%）分别为2.8、1.3、3.0、2.5、 3.2和3.9，结果表明本法能获得满意的精密度和准确性。